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Hormônio do crescimento: teste de drogas

05 Dec 2016

Executar um teste de drogas em recombinant somatotropin hormônio (o esterlino) da pessoa por muitos anos considerou-se como uma tarefa impraticável. Contudo recentemente mostrou-se que pelo menos duas aproximações independentes permitem estabelecer o esterlino recombinant aplicado do atleta ou não. Os métodos de análise desenvolvidos sofrem a prova agora e será possível esperar aplicar-se como teste de doping oficial já no perto do futuro.

O problema principal consiste em que diferentemente de erythropoietin algum dos métodos oferecidos não permite definir o esterlino na urina. Causa-se em primeiro lugar pela concentração extremamente baixa do hormônio na urina que não permitem encontrá-lo pelos métodos existentes. Além disso, a alocação de somatotropin com a urina representa o processo difícil que se caracteriza pela variabilidade considerável e ainda permanece mal estudado (Saugy et al., 1996). O método IEF aplicado em caso de ERO em testes de urina é impróprio para a análise do esterlino como o último não tem sites web glycosylation. Segundo os dados modernos, o esterlino de moléculas de uma origem recombinant é quase completamente idêntico à fração principal do esterlino de moléculas, hypophysis, e qualquer diferença física e química entre eles não se revela.

No entanto, até apesar da falta dos sites web de glycosylation, esterlino no sangue sistema circulatório fornece-se pela mistura de isoforms moleculares (Baumann, 1999). A pesquisa destas isoforms progrediu não enquanto em caso de gonadotrophin, contudo para os anos passados ficou possível de identificar alguns componentes principais. Junto com a isoform principal que tem peso molecular 22 kd e compõe-se de 191 equilíbrio restante amino-ácido no sangue o segundo da representação quantitativa encontra-se, isoform mais curta com um peso molecular de 20 kd em que sequência lá não são nenhum ácido amino 32 — 46 (Hashimoto et al., 1998; Tsushima et al., 1999; Leung et al., 2002). Também há até mais esterlino formas curtas, contudo vêm à luz mutávelmente e completamente ainda não se analisam. Alguns deles representam produtos da hidrólise ou degradação do esterlino de moléculas. As isoforms de esterlino podem existir na forma de monomers, regulador para iluminação e multimer que se compõe do idêntico (gomodimer) ou várias (heterodimeasure) isoforms.

Em muito impacto de casos do esterlino em um corpo humano medeia o fator que recebeu o nome a insulina como fator do crescimento de mim (IFR-1) produzido principalmente em um fígado, e também localmente no osso cartilaginous e muitos outros tecidos, IFR-1 no sangue sistema circulatório onde contata com a proteína de união específica (Le Roith ct al., 2001). O maior valor deles proteína 3 (IGFBP-3), e também e labile subjedinitsa (ALS) ácido que produtos também são abaixo do esterlino de controle tem IFR. Pelo menos, para IGFBP-3 mostra-se que esta proteína pode fazer o próprio impacto independente da vinculação com IFR-1 e por isso pode considerar-se como hormônio de péptido independente. Em conjunto IFR-1, IGFBP-3 e ALS criam um complexo triplo que tem a espera de vida maior, em comparação com as moléculas que o criam separadamente. Não se esqueça tomam Hepatamin de melhores resultados.

Uma da estratégia da pesquisa do teste conveniente da detecção da aplicação do esterlino como um stimulator compôs-se na avaliação de modificações quantitativas de produtos do impacto dinâmico pharm do esterlino, no determinado aumento possível na quantidade de componentes do complexo triplo que excede a variedade da variabilidade natural ao nível (Dali et al., 2000). Uma de vantagens de tal teste iria se compor que o tempo de vida de produtos do impacto dinâmico pharm do esterlino excede o tempo de vida do hormônio que permite aumentar um período de tempo durante o qual há uma possibilidade da detecção do abuso do hormônio somatotropny. O consórcio científico internacional executou uma série ampla uma pesquisa, os produtos do impacto dinâmico pharm do esterlino dirigido a estudar da ordem dependendo de vários fatores, inclusive atividades físicas agudas e crônicas, idade, sexo, uma origem étnica e danos (Wallace ct al., t999, 2000; Longobardi ct al., 2000; Ehmborg ct al., 2003). A confirmação do fato da indução das modificações na estrutura do impacto dinâmico pharm que acontece em caso da aplicação regular longa do esterlino e tem as características que permitem distinguir eles das modificações induzidas por ocupações de treino ou outro stimulators tornou-se a realização principal das pesquisas conduzidas. Especialmente, a ordem de descrição de modelo estatística de um número de produtos do impacto dinâmico pharm de hormônio e consideração de distinções sexuais criou-se. Também o fato que durante a determinação da avaliação de fatores de determinação dos métodos da análise imune usada com esta finalidade se fez e para cada um deles é importante as variedades específicas da sensibilidade estabeleceram-se. Não todos os métodos comerciais disponíveis satisfazem condições estabelecidas durante as pesquisas que causam a necessidade da realização da seleção cuidadosa de sistemas da análise imune que se supõem usar-se além disso. Além disso, como o modelo estatístico muito difícil é a base deste método da prova, é necessário imaginar limites da variabilidade de resultados das técnicas usadas e garantir o uso fixado em testes de anticorpos idênticos. Pode representar um problema como muitos tipos da análise imune são baseados no uso o policlon agora, mas não anticorpos monoclônicos. Contudo os anticorpos de policlon não podem receber-se em grandes números e depois da terminação de um lote é impossível garantir que o seguinte lote será idêntico ao primeiro. Tudo isso permite entender porque as organizações de antidoping internacionais pagam assim atenção considerável para o desenvolvimento de tecnologias do recibo de anticorpos monoclônicos, convenientes para o uso. Depois de refinar de todos os detalhes metódicos, este método da prova pode ser muito eficaz mas à comparação com o sangue o teste aplicou a um teste de drogas em ERO.

Uma mais aproximação dirige-se à análise diretamente do esterlino. Na diferença de uma variedade de isoforms do hormônio, hypophysis, recombinant hormônio sempre se fornece pela forma única com um peso molecular de 22 kd. Também a produção de uma forma de recombinant com um peso molecular de 20 quilogramas se descreve, mas portanto proteína só usou-se em vária prova clínica. Recombinant somatropin, aplicou ao tratamento do déficit do hormônio do crescimento em crianças, adolescentes e pessoas da idade madura, tem o peso molecular 22 quilogramas, é óbvio que a mesma medicina usa que stimulators no esporte. Tal homogeneidade ou "a falta da heterogeneidade" em formas de recombinant do hormônio que o distingue de uma variedade natural das isoforms de esterlino hypophysis, também fazem uma base do assim chamado "metol da análise imune diferencial" aplicou a um teste de drogas no esterlino recombinant (Z. Wu et al., 1999): a introdução em um organismo de recombinant monomeric esterlino com um peso molecular de 22 quilogramas conduz para aumentar no conteúdo relativo desta isoform no sangue. Esta modificação em uma variedade de isoforms do hormônio fica nova até mais evidente em caso da aplicação longa do esterlino quando a ligação do mecanismo da regulação de regresso negativa nesta situação conduz para diminuir na substância segreda do hormônio endógeno hypophysis (Wallace et al., 2001a). A proteção dos anticorpos monoclônicos recebidos usando vária medicina do esterlino endógeno da pessoa permitiu desenvolver duas versões do immunoanalysis. Na primeira opção os anticorpos imobilizados unem a isoform de hormônio do crescimento principalmente de 22 quilogramas, e no segundo é principalmente somatropin "uma origem hypophysial", fornecido vário mas ao tamanho por isoforms (Bidlingmaier et al., 2000). A análise de amostras do soro por meio de ambas as versões da análise imune permite determinar o conteúdo relativo de uma isoform do hormônio com um peso molecular de 22 quilogramas, mas à comparação com os outros ("esterlino total") e graças a ele para revelar que as amostras com o anormalmente alto teor de 22 g de STG.It se confirmaram que as modificações em uma variedade de isoforms do hormônio do crescimento só se causam pela aplicação do esterlino recombinant enquanto na estimulação da substância segreda depois que o aumento de atividade físico na quantidade de todas as formas do hormônio se observa (Wallace et al., 2001b). Além disso, a sensibilidade de um método inicial aumentou-se significativamente (Bidlingmaicr et al., 2003). O ego ficou possível graças à recepção de novos anticorpos monoclônicos. Junto com ele o complexo dos testes de confirmação independentes que também são baseados na aplicação dos novos anticorpos monoclônicos que têm afinidade ao epitopa diferenciado se desenvolveu. O último é uma condição indispensável da aceitabilidade da análise imune para executar um teste de drogas: cada tipo da análise tem de confirmar-se com outra análise dirigida a uma alternativa epitop do nasmolecule interessante que permitirá obter os dados adicionais necessários para a identificação de uma molécula.

As características de um método da análise imune diferencial limitam a sua aplicação só à condução de testes de doping não permite distinguir a variedade natural das isoforms de esterlino e a medicina do hormônio extraído de hypophysis de pessoas mortas na estrutura. Além disso, devido a período de meia-vida extremamente curto de esterlino no sangue sistema circulatório (aproximadamente 15 minutos) a possibilidade da detecção do uso do hormônio do crescimento como um stimulator permanece limitada 24 — 36 horas. É óbvio que até o desenvolvimento de métodos mais sensíveis não permitirá superar esta restrição como se mostrou que depois da desintegração da proteína recombinant e a terminação da resposta negativa do sistema do feedback, o hypophysis começa novamente a variedade habitual de isoforms do hormônio. De outro lado, o fato que para a realização do hormônio de influência estimulante tem de aceitar-se a probabilidade de aumentos diária da identificação do atleta que aplica droga durante os testes inesperados que não se unem com a participação em competições.

A aplicação de um método da análise imune diferencial também exige a justificação incondicional da competência dos tipos usados da análise imune. Além disso, como o cálculo de uma proporção executa-se, é necessário definir precisamente o grau da reproduzibilidade de resultados de métodos separados e a relação que considera a influência potencial da variabilidade de resultados no tamanho da proporção contada. A redução essencial na variabilidade de resultados pode realizar se usar a mesma chapa titrating micro com os anticorpos imobilizados de ambas as análises: uma metade de uma chapa é coberta de anticorpos monoclônicos da isoform de esterlino com um peso molecular de 22 kd e outra metade — anticorpos monoclônicos do hormônio total da altura humana. Depois da adição de calibradores, kontroly também é modelo a cada metade de uma chapa, todo o ñå é coberto dos mesmos anticorpos monoclônicos descobrem. Tal ordem da realização da análise imune permite reduzir significativamente a variabilidade que surgirá seguramente no momento da distribuição desigual do material de uma amostra entre duas várias chapas (Bidlingmaicr et al., 2000).

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